俄羅斯專享會294的凍存原理主要基于溫度對細胞生命活動的影響。當細胞溫度降至0°C以下時，細胞會經歷脫水，其內部溶解物質濃度升高，并可能形成冰晶。冰晶的大小對細胞產生不同程度的影響，大型冰晶容易導致細胞膜及細胞器損傷和破裂，從而顯著降低復蘇后細胞的存活率及功能。因此，在凍存細胞時，我們通常采取兩項措施：一是加入低溫保護劑，二是實施慢凍操作。
俄羅斯專享會294建議凍存時機應選擇在細胞生長良好、密度達到80-90%、數量一般在106-107/ml的狀態下進行。活力低下的細胞，經過凍存后的存活率往往較低。
低溫保護劑中，二甲基亞砜（DMSO）廣泛應用。它不僅能迅速滲透細胞，還提高細胞膜對水的通透性，降低冰點，并延緩凍結過程。這使得細胞內的水分能夠在凍結前有效地排出細胞外，形成胞外冰晶，從而減少胞內冰晶的產生，降低對細胞的損傷。
實施慢凍細胞的方法可以通過程序降溫盒來進行，這樣能有效防止大冰晶的產生。如果沒有程序降溫設備，亦可依次將細胞放置在4°C（1小時）、-20°C（2小時）與-80°C（過夜）中，這樣大多數細胞也能適應。
凍存液的配制應提前進行，在室溫下備用，以防臨時配制時產生的熱量損傷細胞（因DMSO加入培養基時會釋放熱量）。常規凍存液的比例為培養基：血清：DMSO=7:2:1；若細胞較為珍貴，可調整為血清：DMSO=9:1。
俄羅斯專享會294的操作步驟如下：
- 用移液器吸去原培養基，加入適量PBS洗滌1-2遍。
- 消化細胞：加入適量胰酶，并放入37°C培養箱進行消化（在10厘米大皿中加入1ml 0.25% 胰酶，消化約4-5分鐘，視細胞類型而定，終止消化的標志為80%-90%的細胞變圓）。
- 消化完成后，加入2倍體積的完全培養基以終止消化，800-1000rpm離心3-5分鐘。
- 準備凍存管，標記日期、細胞類別、操作人及代數，細胞離心后去上清，加入凍存液重懸，每管1-1.5ml，轉移到凍存管中。
- 將凍存管放入程序降溫盒中，-80°C過夜，隨后轉移至液氮中保存。
注意事項包括：
- 細胞添加凍存液后，需立即放入-80°C保存，避免常溫下放置過久。
- 凍存細胞在-80°C儲存一般不建議超過半年，而在液氮中通常不建議超過2年。
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