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細胞系建立概述 - 俄羅斯專享會294

發布時間:2025-02-20   信息來源:軒轅茜樹

細胞系與細胞株的概念
1. 細胞系(Cell Line):細胞系是指在原代培養后成功傳代形成的細胞,這些細胞來源于原代培養物中的細胞世系(Lineage of Cells)。
2. 細胞株(Cell Strain):細胞株是通過選擇或克隆方法從原代培養物或細胞系中獲得的,具有特定性質或標志物的細胞。如果不能持續傳代或傳代次數有限,則稱為有限細胞株(Finite Cell Strain);如果可以持續傳代,則稱為連續細胞株(Continuous Cell Strain)。對于人類腫瘤細胞,若體外培養超過六個月且穩定生長并可以連續傳代,則可稱為連續性株或系。建立細胞系(或株)的要求
細胞的認可標準因具體情況而異,目前尚無統一規范。對于用于原代培養的細胞,需確保供體均一,取材部位及組織種類等條件穩定。尤其是用于長期培養或反復傳代的細胞,需提供以下信息:
1. 組織來源:細胞供體的物種、性別、年齡及取材的器官或組織。如為腫瘤組織,需包括臨床和病理診斷信息及病歷號。
2. 細胞生物學檢測:了解細胞的基本與特殊生物學特性,包括細胞形態、特異結構、生長曲線、分裂指數、倍增時間及接種率等。對于腫瘤細胞,需要通過軟瓊脂培養、異體接種致瘤實驗及正常組織侵潤力檢測等方式確認其來源及惡性特性。
3. 培養條件與方法:需明確細胞系(或株)的適應環境,包括培養基、血清類型及用量,以及適宜的pH值。細胞建株的要點與基本過程
1. 腫瘤細胞培養技術要點
    取材主要來自外科手術或活檢的腫瘤組織,避免使用壞死組織。優選瘤細胞集中且活力較好的部位進行取材。若無法及時培養,可進行凍存。培養和凍存方法應遵循正常組織的標準。
    在腫瘤組織中常含有成纖維細胞,這些細胞可能與腫瘤細胞一同生長,導致癌細胞生長受阻,因此需采取機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法等方法仔細排除。
    為了提高腫瘤細胞的存活率與生長率,因腫瘤細胞在體外不易培養,建株難度較大。需采用合適的底物及細胞生長因子,以適應細胞在新環境中的生長需求。2. 人類淋巴母細胞建株方法
    1. 在離心管中加入4ml肝素抗凝血及2ml RPMI 1640,混勻后緩慢加到淋巴細胞分離液的液面。
    2. 靜置30分鐘后以1500rpm離心15分鐘,分離白血球層。
    3. 用RPMI 1640對白細胞進行兩次洗滌。
    4. 將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養基中,加入10μl環胞霉素和100μl EBV,混勻后培養。
    5. 觀察細胞轉化與生長情況,一般每隔3-4天決定是否換液。
    6. 細胞數量明顯上升后可轉入25ml培養瓶中繼續培養,待細胞生長達一定數量后進行凍存,凍存前需進行核型分析以及存檔。在生物醫療相關的研究中,了解這些細胞培養與建立的基本原理是至關重要的,尤其在確保細胞質量和研究成果的可靠性方面。俄羅斯專享會294致力于在該領域提供更多的支持和資源。

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