左旋咪唑是一種合成的驅(qū)蟲藥，廣泛用于獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，主要用于治療由線蟲引發(fā)的寄生蟲感染。此藥物通過靶向線蟲的乙酰膽堿離子通道受體發(fā)揮其驅(qū)蟲效果（Martin等）。除了醫(yī)學(xué)應(yīng)用，左旋咪唑在多個(gè)研究領(lǐng)域中價(jià)值頗高，尤其是在秀麗隱桿線蟲的麻痹實(shí)驗(yàn)中。它能夠有效誘導(dǎo)這些線蟲的癱瘓，因此在研究神經(jīng)元功能和肌肉生理學(xué)方面具有重要意義。通過以下實(shí)例，研究人員可以深入了解毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，并利用此框架開展不同藥物的毒性研究。
材料準(zhǔn)備包括：帶蓋的6孔板、NGM培養(yǎng)基、M9緩沖液、100mM的左旋咪唑原液、同步成蟲種群以及WMicrotrackerArena設(shè)備。簡(jiǎn)易操作流程如下：
1. 微孔板制備: 按照標(biāo)準(zhǔn)程序制備NGM培育基。
2. 在加入鹽和膽固醇后，立即將左旋咪唑加入到55°C的NGM瓊脂溶液中。
3. 左旋咪唑片未接種OP50菌株，制備后在兩周內(nèi)可使用，并需保存在4°C的容器中。
4. 測(cè)定是在實(shí)驗(yàn)開始前已將模板降至室溫的板上進(jìn)行的。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
- 在NGM培養(yǎng)皿中培養(yǎng)同步的成蟲種群（OP50）；
- 用M9緩沖液將蠕蟲從培養(yǎng)皿中取出，并轉(zhuǎn)移到無菌15毫升試管中；
- 讓蟲子靜置，倒掉上清液，注意不要擾亂底部顆粒；
- 用5ml M9緩沖液進(jìn)行清洗，短暫搖動(dòng)或翻轉(zhuǎn)試管；
- 重復(fù)上述清洗步驟，倒出上清，加入3ml M9緩沖液；
- 計(jì)數(shù)每10μl的蟲子數(shù)，計(jì)算平均值；
- 準(zhǔn)備懸浮液，得到[35蟲/10μl]；
- 將10μl蟲液轉(zhuǎn)移至6孔板；
- 使用wMicroTrackerARENA設(shè)備觀察蠕蟲活動(dòng)。
注意：至少進(jìn)行三次技術(shù)重復(fù)，并至少進(jìn)行兩次生物重復(fù)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，左旋咪唑對(duì)N2的運(yùn)動(dòng)活性呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性抑制反應(yīng)曲線，比較了不同濃度的左旋咪唑（0μM(對(duì)照)、100μM和200μM）的治療效果。在6孔板中，每孔選取35個(gè)年輕成蟲N2，在23℃下記錄其運(yùn)動(dòng)活動(dòng)為期4小時(shí)。數(shù)據(jù)代表四個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值，并進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。
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